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摘要
目的观察5,6-二氢环戊烯1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(CPDT)对高糖环境下大鼠视网膜Müller坌田胞活性及其线粒体活性氧(ROS)生成量的影响,初步探讨CPDT对高糖环境下Müller细胞的保护作用及其机制。方法 Sprague Dawley大鼠Müller细胞分为25 mmol/L对照组(A组)、65 mmol/L高糖(B糖)组、高糖+45μmol/L CPDT组(C组)、高糖+60μmol/LCPDT组(D组)、高糖+70μmol/LCPDT组(E组)。培养72 h后,水溶性四唑盐(WST)-8法检测各组Müller细胞的细胞相对增生率;流式细胞仪测定各组Müller细胞ROS生成量及细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Müller细胞中核因子-E2相关因子2(Nrf2)、血红紊合酶-1(HO-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax蛋白)表达的变化。结果 WST-8法检测结果显示,与A组比较,B组Müller细胞活性明显下降,差异有统计学意义(t=39.59,P<0.05)。与B组比较,C组Müller细胞活性无明显提高,差异无统计学意义(t=0.97,P>0.05);D、E组Müller细胞活性恢复,差异有统计学意义(t=-4.67、-7.52,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与A组比较,B组Müller细胞中ROS生成量增加,差异有统计学意义(t=-30.99,P<0.05);与B组比较,D组Müller细胞中ROS含量明显下降,差异有统计学意义(t=27.68,P<0.05)。Western blot检测结果显示,与A组比较,B组Müller细胞Bax、Nrf2、HO-1蛋白表达显著上调,差异有统计学意义(t=-11.03、-63.17、-11.44,P<0.05);Bcl-2蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(t=7.861,P<0.05)。与B组比较,D组Müller细胞Nrf2、HO-1、Bax蛋白表达均下调,差异有统计学意义(t=15.1l、26.59、6.27,均P<0.05);Bcl-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t=-6.53,P<0.05)。结论 CPDT降低高糖环境下Müller细胞中ROS含量,下调Nrf2、HO-1、Bax蛋白表达;其机制与激活Nrf2/HO-1氧化应激通路,改变Bcl-2蛋白之间的平衡性,影响线粒体氧自由基量生成,从而抑制细胞凋亡有关。
- 出版日期2017
- 单位西南医科大学
