抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体的质量评价

作者：俞小娟; 于传飞; 刘春雨; 武刚; 李萌; 王文波; 郭璐韵; 付志浩; 赵雪羽; 王兰^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(10): 1198-1205.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.004004

• 程序性死亡受体1
• 细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4
• 双特异性抗体
• 活性
• 纯度
• 电荷异质性
• 肽图
• 糖型

目的 建立针对抗程序性死亡受体1 (programmed cell death protein 1,PD-1)/细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,CTLA-4)双特异性抗体的关键质量属性质控方法 。方法 采用报告基因法测定PD-1靶点的细胞生物学活性,流式细胞荧光分选法测定CTLA-4靶点的竞争结合活性;还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法进行抗体分子大小变异体的控制;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)法测定电荷异质性;运用肽图对抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体进行鉴别;超高效液相色谱法分析糖型。结果 PD-1靶点的细胞生物学活性半数最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)为(6.91±0.78) nmol/L,相对参比品的生物学效价为(103.50±13.08)%,RSD为12.64%;CTLA-4靶点活性的EC50为(0.35±0.28) nmol/L,相对参比品的生物学效价为(99.30±9.15)%,RSD为8.32%;还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为(98.86±0.02)%。非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(93.07±0.13)%,片段百分比为(4.44±0.13)%,聚体百分比为(2.49±0.15)%。SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(97.20±0.01)%,聚体峰面积百分比为(2.68±0.01)%。iCIEF分析的A组峰面积百分比为(38.43±0.54)%,B组峰面积百分比为(43.26±0.32)%,C组峰面积百分比为(11.31±0.14)%,D组峰面积百分比为(7.00±0.17)%。肽图检测抗PD-1/CTLA-4抗体具有相应的特征图谱,能够用于鉴别。占比最高的糖型为G0F,含量为(41.06±0.11)%;含唾液酸的糖型共3种,分别为G2F+G1F-NANA、G2F-NANA和G2F-2NANA,含量分别为(12.44±0.12)%、(12.00±0.05)%和(5.37±0.05)%,含唾液酸糖型的总体含量为(29.80±0.20)%。结论 针对抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体的关键质量属性建立了相应的质量控制方法 ,可确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法 和策略提供了参考。

• 出版日期2023
• 单位中国食品药品检定研究院