NFKBIA 3'UTR不同基因型载体的构建及其功能差异性比较

作者：杨朔; 李嘉丽; 毕惠嫦; 周守宁; 刘晓曼; 曾行; 胡冰芳; 黄民

来源：药学学报, 2016, 51(01): 80-85.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2015-0611

• NFKBIA
• 3’非翻译区
• 单核苷酸多态性
• 荧光素酶报告基因载体
• rs696
• rs8904

验证NFKBIA基因3’非翻译区(3’UTR)两个SNP--rs8904C>T和rs696G>A的功能。以两个位点分别为CC纯合子和GA杂合子基因型的人全基因组DNA为模板,通过设计不同引物以扩增长度为503 bp的NFKBIA基因3’UTR片段,经测序验证后将该片段克隆至荧光素酶载体pGL3-promoter中,构建4种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G、pGL3-rs8904C/rs696A、pGL3-rs8904T/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696A,并转染LS174T细胞,检测荧光素酶活性。与转染了pGL3-vector组(阴性对照)相比,转染重组双荧光素酶报告质粒的荧光素酶活性均显著下降(P<0.001)。对于rs696G>A,含等位基因A的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696A和pGL3-rs8904T/rs696A的荧光素酶活性分别比含等位基因G的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696G下降约45.1%(P<0.05)和56.1%(P<0.001)。对于rs8904C>T,含等位基因T的两种重组质粒分别与含等位基因C的两种重组质粒相比,荧光素酶活性无显著性差异。NFKBIA基因3’UTR双荧光素酶报告基因载体构建成功,并发现rs696G>A会减弱荧光素酶活性的表达,rs8904C>T对荧光素酶活性的表达无明显影响。

• 出版日期2016
• 单位中山大学