抗Sclerostin单链抗体基因的构建、表达及活性分析

作者：姚琦; 张立才; 倪杰; 侯宇; 刘长振; 郁卫东; 张里程

来源：武警医学, 2013, (12): 1047-1052.

DOI：10.14010/j.cnki.wjyx.2013.12.002

• 骨硬化素
• 单链抗体
• 骨质疏松
• 表达
• 活性 sclerostin
• scFv
• osteoporosis
• expression
• activity

目的构建抗Sclerostin(SOST)单链抗体原核表达载体并对表达蛋白进行活性分析。方法提取抗SOST单克隆抗体5H3D1杂交瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体轻链可变区基因(VL)和重链可变区基因(VH)并通过重叠延伸拼接(SOE)PCR方法,在VL和VH基因之间引入Linker(Gly4Ser)3,连接成单链抗体SOST-scFv(VL-Linker-VH)。将scFv基因克隆至表达载体PET-22b(+)后转入HEK293细胞进行分泌表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA和West-blot检测表达蛋白的反应活性,茜素红结节染色法评估单链抗体对体外培...

• 出版日期2013
• 单位中国科学院微生物研究所; 中国人民解放军总医院; 北京大学人民医院; 首都医科大学