蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建

作者：唐波; 杜娟; 杨力侠; 王小海; 吴海波; 吴勇延; 郭泽坤

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2012, (10): 199-206.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2012.10.007

• Sumo
• 蛋白质体外修饰
• 原核表达
• Oct4
• Sox2 Sumo
• in vitro protein modification
• prokaryotic expression
• Oct4
• Sox2

【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western...

• 出版日期2012
• 单位西北农林科技大学