青岛百合LtXTH5的克隆及VIGS表达载体构建

作者：池秀凤; 姜新强; 李岩硕; 李伟; 王奎玲; 刘庆华^*

来源：北方园艺, 2020, (15): 74-81.

• 青岛百合
• LtXTH5
• 克隆
• 序列分析
• 沉默载体

以青岛百合(Lilium tsingtauense)的花被片作为试材,采用了RT-PCR的方法从青岛百合中分离到LtXTH5基因,并进行生物信息学分析和病毒诱导沉默表达载体的构建,研究了花发育基因LtXTH5的基本理化性质和载体构建方法,以期为后期LtXTH5生物学功能的验证奠定基础。结果表明:LtXTH5基因(登录号MN245449)的开放阅读框包含882 bp,编码293个氨基酸;生物信息学分析预测LtXTH5蛋白相对分子量为33.8 kDa,分子式为C1536H2283N407O436S12,理论等电点(pI)为7.03,脂肪指数68.23,不稳定指数为31.68,LtXTH5是亲水性蛋白,具有信号肽;基序分析发现不同植物XTH中的保守基序数目不同,LtXTH5含有9个基序;序列比对结果表明LtXTH5氨基酸序列含有DEIDFEFLG催化活性位点和GH16XET结构域,是典型的XTH家族成员;系统进化树分析表明LtXTH5与拟南芥AtXTH5亲缘关系最近,属于I/II亚家族,并且具有转糖基酶或水解酶活性。利用LtXTH5的5′端537 bp片段和pTRV2载体质粒成功构建了沉默载体(TRV2-LtXTH5),并将TRV2-LtXTH5载体成功转至农杆菌GV3101中,下一步拟用已转入TRV2-LtXTH5载体的农杆菌菌液对烟草进行侵染,进一步探究LtXTH5基因的功能。

• 出版日期2020
• 单位青岛农业大学