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摘要
目的:采用基因重组技术获得有酶活性的重组人多胺氧化酶(polyamine oxidase,PAO)并制备兔抗人多胺氧化酶多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人多胺氧化酶cDNA,构建PAO原核表达质粒pET-15b/PAO并转化E.coli的BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组PAO经Ni-NTA亲和层析纯化和透析复性后,化学荧光法测定酶活性。用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化的重组人PAO蛋白,皮内接种日本大耳白兔以制备多克隆抗体。以ELISA、Western blot和免疫细胞化学法分别检测兔血清中抗体滴度和抗原特异性。结果:纯化并透...
- 出版日期2008
- 单位三峡大学
