科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
本研究旨在探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin，BCG）感染人单核巨噬细胞THP-1后，钙结合蛋白S100A4对细胞自噬的调控作用。以感染复数为10:1的BCG感染THP-1细胞不同时间，用Western blot检测S100A4和LC3Ⅱ的表达，以确定最佳感染时间，并采用透射电镜观察自噬体数量变化。在BCG单独感染或与S100A4小干扰RNA共处理THP-1细胞12 h后，采用qRT-PCR检测S100A4及自噬相关因子——微管相关蛋白轻链3II (microtubule-associated protein light chain 3 Ⅱ， LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白7(autophagy-related gene 7， Atg7)、Beclin-1在mRNA水平上的表达，采用Western blot检测S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1在蛋白水平的表达。利用mRFP-GFP-LC3检测自噬流，激光共聚焦显微镜观察细胞中mRFP-LC3和mRFP-GFP-LC3点状聚集。结果显示：在BCG感染THP-1细胞不同时间后，S100A4和LC3Ⅱ在蛋白表达水平随感染时间的延长先上升后下降，在12 h时表达最高（P<0.001），且自噬体数量明显增多。在mRNA水平上，与siNC组相比，siNC+BCG感染组S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的mRNA表达水平显著上调（P<0.05），当BCG和siS100A4共处理后，S100A4 、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1在mRNA水平的表达显著（P<0.05）或极显著（P<0.01，P<0.001）下调；在蛋白水平上，与未感染组相比，S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的蛋白表达量显著增多（P<0.05），BCG和siS100A4共处理后，S100A4 、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的蛋白表达量均极显著减少（P<0.001）；与未感染组相比，BCG组自噬体的数量极显著增多（P<0.01），siS100A4+BCG组与siNC+BCG组相比，自噬体的数量显著减少（P<0.05）。S100A4对BCG感染巨噬细胞诱导的自噬具有调控作用，S100A4能够促进BCG诱导的THP-1细胞自噬。
