抗癫痫肽重组腺伴病毒载体的构建及鉴定

作者：王宗仁; 邵中军; 李晶华; 行利; 马静; 龙铟; 张磊; 赵艳玲

来源：中草药, 2005, 36(12): 1844-1846.

DOI：10.3321/j.issn:0253-2670.2005.12.034

• 抗癫痫肽
• 腺伴病毒载体
• 构建

目的为了研究蝎毒癫痫肽对癫痫模型的治疗作用,构建并产生重组腺伴病毒(AAV)载体。方法将AEP外源性核酸片段插入AAV-shufer质粒pSSHG-Neo的KpnI-BamH I位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒pFG140、包装质粒pAAV/Ad及构建的pSSHG-AEP三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎293细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/AEP,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为1.46×1012PFU/mL。结论成功地制备了AEP重组腺伴随病毒(rAAV/AEP)载体,为癫痫基因治疗实验奠定了基础。

• 出版日期2005
• 单位西京医院; 公共卫生学院; 复旦大学; 第四军医大学