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摘要
目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,筛选出能够持续分泌人血管内皮细胞生长因子(hVEGF165)的细胞株,为难于愈合创面(如糖尿病性慢性溃疡)的治疗提供有效方法。方法:将含有hVEGF165的穿梭质粒pCDNA3-hVEGF165导入NIH3T3细胞,使用G-418根据有限稀释法筛选出7个单克隆细胞株。挑选出整合有hVEGF165基因且表达最高的一个细胞克隆在DNA、mRNA和蛋白质水平进行鉴定,同时使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、鸡胚实验检测表达产物的生物学活性。结果:PCR和Southern印迹证明hVEGF165基因已整合入NIH-3T3细胞基因组,RT-PCR和Northern印迹...
- 出版日期2006
- 单位上海交通大学
