慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响

作者：孟冰; 徐延勇; 程力维; 曹佳; 杜芬; 喻红

来源：武汉大学学报(医学版), 2015, (01): 1-5+35.

DOI：10.14188/j.1671-8852.2015.01.001

• 对氧磷酯酶1
• 慢病毒载体
• 巨噬细胞
• TNF-α Paraoxonase 1
• Letivirus Vectors
• Tumor Necrosis Factor-α
• Macrophage

目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响。方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为PmeⅠ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定。磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,Western Blotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性。含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(T...

• 出版日期2015
• 单位武汉大学