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摘要
背景:原花青素因其高效的抗氧化活性成为目前国际上公认的人体活性氧自由基清除剂。目的:探讨原花青素是否对高糖诱导髓核细胞凋亡具有显著抑制作用,并分析其具体分子机制。方法:健康2月龄新西兰大白兔,由山东康大生物科技有限公司提供,实验方案经山东省保健科技协会批准。体外培养兔髓核细胞,传至5代。取第3代髓核细胞(细胞浓度至1×108 L-1),分别接种在6个4孔培养板中,分别加入不同浓度原花青素(0,10,20,30,40,50,60μmol/L),采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖活性,以确定合适的原花青素浓度。实验分为4组:①对照组:无高浓度葡萄糖和原花青素;②高糖组:培养液中含有100 mmol/L葡萄糖,无原花青素;③原花青素组:培养液中含有40μmol/L原花青素,无高浓度葡萄糖;④高糖+原花青素组:40μmol/L原花青素预处理6 h后再加入100 mmol/L高浓度葡萄糖。采用倒置显微镜观察髓核细胞形态、绘制细胞生长曲线;检测细胞凋亡率、细胞内总活性氧、血红素氧合酶的表达情况。结果与结论:①兔髓核细胞呈多角形、短梭形,随着传代次数增加,细胞伸出伪足,胞体逐渐变细长;②细胞呈"S"型曲线生长。传代后第1天,细胞生长缓慢,从第2-5天细胞生长迅速,随着细胞传代次数的增加,细胞的生长活性逐渐降低;③通过筛选发现,原花青素浓度为40μmol/L时为较适宜浓度;④流式细胞仪检测发现,高糖组髓核细胞凋亡率显著增加,原花青素预处理髓核细胞后,与高糖组比较,细胞凋亡率显著降低(P <0.05);⑤Western blot检测显示,原花青素可显著增加血红素氧合酶1的表达,且血红素氧合酶1的表达量与细胞凋亡率、活性氧自由基积聚程度和细胞增殖活性趋势相反;⑤结果说明,原花青素可通过上调血红素氧合酶1的表达,抑制高糖诱导的髓核细胞凋亡增加、细胞内活性氧积聚和增殖活性下降。
- 出版日期2019
- 单位诸城市人民医院; 济宁市第一人民医院
