柯萨奇病毒A6型VP1和VP2基因的原核表达及多克隆抗体制备

作者：陈静; 李鹏飞; 吴杰; 孟胜利; 申硕; 王泽鋆^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2018, 32(06): 640-645.

• 柯萨奇病毒A6型
• VP1
• VP2
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virus A6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6 VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6 VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化,纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔,获得兔抗血清。Western blot(WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定抗体。结果 CVA6 VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确,获得了高纯度的CVA6 VP1和VP2融合蛋白,WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。结论成功构建了CVA6 VP1和VP2原核表达载体,获得了重组的CVA6 VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。

• 出版日期2018
• 单位三峡大学; 武汉生物制品研究所