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摘要
通过构建pFastBacTMHT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTMEscherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆。PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因。提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体(Bacmid-scFv)侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征。通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf 9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.010 0μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0~10.000 0μg/ml。可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应。
