Allo-HSCT患者CD8+T细胞亚群恢复的监测及临床意义

作者：杜立坤

来源：硕士, 河北医科大学, 2017.

• 异基因造血干细胞移植
• T细胞
• CD8+T细胞
• 初始CD8+T细胞
• 记忆CD8+T细胞
• 移植物抗宿主病
• CMV感染
• 抗人胸腺细胞免疫球蛋白

目的:研究异基因造血干细胞移植（Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT）后T细胞、CD8+T细胞亚群在12个月内的恢复情况,探讨其与抗人胸腺细胞免疫球蛋白（Antithymocyte Globulin,ATG）的应用,急性移植物抗宿主病（Acute graft-versus-host disease,aGVHD）的发生、巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）感染等临床表现的相关性,为移植后aGVHD及CMV病毒感染的预防与监测等提供临床依据。方法:1选择2014年2月至2016年12月在河北医科大学第二医院血液内科病房进行Allo-HSCT的患者共44例进行回顾性研究分析。2患者临床情况:1)年龄:中位年龄32.5岁（13-54岁）;其中男性26例,女性18例;2)疾病诊断与分期:急性白血病（AL）33例,其中CR1期23例,≥CR2期8例,NR期2例;重型再生障碍性贫血（SAA）4例;骨髓增生异常综合征（MDS）4例,2例为MDS-RAEBⅠ型,2例为MDS-RAEBⅡ型,IPSS-R分期均为高危组;不典型慢性粒细胞白血病（aCML）1例,慢性粒细胞白细胞加速期（CML-AP）1例;T淋巴母细胞淋巴瘤1例。3)观察截止日期:2016-12-31,中位观察时间350天（37-1248天）。4)供受者HLA配型情况:HLA全相合同胞供者（MSD）16例,HLA全相合非血缘供者（MUD）2例,HLA半相合亲缘供者（HRD）26例。5)移植方式:亲缘供者采用G-CSF动员后的骨髓+外周血干细胞移植（39/44例）或外周血干细胞移植（3/44例）,非血缘供者采用G-CSF动员后的外周血干细胞移植（2/44例）。6)预处理方案:SAA CTX+BU+ATG±FLU,恶性血液病改良BU+CY±ATG。7)回输干细胞计数（均数±标准差）:MNC 5.88±1.35*10^8/Kg（受者体重）,CD346.02±2.61*10^6/Kg（受者体重）。3对照组选择:造血干细胞移植健康供者25例。4检测时间:受者移植后+28d、2m、3m、4.5m、6m、9m、12m;对照组g-csf动员前。5检测方法:1)于观测时间点采集移植患者与健康供者外周血4ml,edta抗凝。流式细胞术（flowcytometry,fcm;美国bd公司facscantoll流式细胞仪）检测t细胞亚群细胞数量变化,由北京海思特临床检验所协助检测。2)移植患者移植后2个月内,每周两次外周血4ml,edta抗凝。实时荧光定量pcr法检测cmv-dna。6抗体组合:t细胞:cd3、cd8+t细胞:cd3/cd8、初始cd8+t细胞:cd3/cd8/cd45ra、记忆cd8+t细胞:cd3/cd8/cd45ro。7诊断标准:血液病诊断标准符合《血液病诊断及疗效标准》[1]。agvhd的诊断和分级标准符合西雅图fredhutchinson肿瘤中心的分级法[2]。移植后100天内为移植早期。外周血cmv-dna>2×102拷贝/ml连续2次为cmv感染。移植后100天内cmv阳性定为移植早期cmv感染。8统计学分析:计量资料的组间比较应用两独立样本的t检验及mann-whitney检验,计数资料的组间比较应用χ2检验,p<0.05认为有统计学差异。结果:1临床情况1.1植入情况44例患者全部成功植入,其中2例血小板植入延迟。粒细胞植活中位时间为11天（9-19天）,血小板植活中位时间为12天（6-39天）。1.2感染及并发症肺部感染15/44例（34.1%）,早期cmv感染25/44例（56.82%）,其中一例发生cmv脑炎;泌尿系感染5/44例（11.36%）,出血性膀胱炎9/44例（20.45%）,化脓性中耳炎2/44例（4.55%）,严重颌面部感染1/44例（2.27%）。agvhd发生26/44例（59.1%）,其中Ⅲ-Ⅳ度agvhd者4/44例（9.1%）。1.3复发及死亡复发7/44例（15.91%）,3例血液学复发,3例基因学复发,1例髓外复发。死亡7/44例（15.91%）,原发病复发死亡2/44例（4.55%）,Ⅲ-Ⅳagvhd死亡3/44例（6.82%）,全身炎症反应综合征合并肺部感染1/44例（2.27%）,肝小静脉闭塞症（vod）1/44例（2.27%）。1.4t细胞亚群检测情况对照组25例全部检测。患者于移植后+28d、2m、3m、4.5m、6m、9m、12m分别有40例、35例、31例、27例、23例、13例及14例进行了t细胞亚群检测。2t细胞恢复情况与对照组相比,t细胞在移植后+28天下降至最低（768.62±495.6/μlvs1747.6±552.17/μl,p<0.001）,之后逐渐上升,+3m仍明显低于对照组（p<0.001）,至+6m恢复至正常水平（1673.36±875.54/μl,p=0.348）,+12m仍在正常水平（1902.31±888.84/μlvs1747.6±552.17/μl,p=0.976）,提示t细胞计数于移植后6个月恢复。3cd8+t细胞及亚群的恢复情况3.1总cd8+t细胞总cd8+t细胞恢复迅速,28天即达到对照组水平（549.44±356.47/μlvs675.60±253.66/μl,p=0.14）,+3m仍在对照组水平,+6m、+9m、+12m已明显高于正常水平（6m1171.9±526.84/μl、9m1011.67±406.69/μl、12m1214.62±558.4/μl,p值分别为0.000、0.004、0.001）。3.2初始cd8+t细胞移植后初始cd8+t细胞恢复较慢,+28天时（120.3±71.98/μlvs300.4±125.65/μl,p<0.001）,+3m仍未恢复（200.71±99.38/μlvs300.4±125.65/μl,p=0.004）,至+6m恢复至正常水平（287.95±183.61/μlvs300.4±125.65/μl,p=0.787）,+12m仍在正常水平,p>0.05。提示移植6个月后初始cd8+t细胞稳定重建。3.3记忆cd8+t细胞+28天记忆cd8+t细胞与对照组无差别（288.4±174.45/μlvs258.8±110.73/μl,p=0.828）,+2m明显升高（487.33±251.86/μlvs258.8±110.73/μl,p<0.001）,此后数值基本保持稳定。提示记忆cd8+t细胞移植后无明显减低,可能与异基因抗原刺激有关,可迅速超过正常水平。4cd8+t细胞亚群恢复与早期cmv感染:移植后25例患者发生早期cmv感染,中位感染时间为35天（10-90天）。+28天cmv感染组cd8+t细胞数值高于未感染组,2m、3m、4.5m均低于未感染组,但均无统计学差异。总细胞、初始cd8+t细胞及记忆cd8+t细胞变化趋势与之相同,仅+2m时初始cd8+t细胞感染组明显低于未感染组。提示初始cd8+t细胞重建延迟可能与早期cmv感染相关。5cd8+t细胞亚群恢复与agvhd的发生:移植后共26例患者发生不同程度的agvhd,中位发生时间为27天（12-90天）,22例患者发生Ⅰ-Ⅱ度agvhd,4例发生Ⅲ-Ⅳ度。agvhd组与无agvhd组相比,总t细胞、cd8+t细胞及记忆cd8+t细胞在+28d、2m均高于无agvhd组,3m、4.5m、6m低于无agvhd组,且记忆cd8+t细胞于+2m明显高于无agvhd组（693.16±442.67/μlvs428±217.69/μl,p=0.042）。初始cd8+t细胞除+6m外,各观察点发生agvhd组均高于无agvhd组,但各组差异无统计学意义。提示agvhd发生时记忆cd8+t细胞明显增高。两组患者与对照组相比,cd8+t细胞+28d无agvhd组明显低于对照组（p=0.016）,而agvhd组已与对照组无差异。3个月时初始cd8+t细胞数量agvhd组已与对照组无差异（p=0.061）,而无agvhd组仍明显低于对照组（p=0.003）,提示agvhd时初始cd8+t细胞增值速度加快。6atg的应用与cd8+t细胞亚群6.144例移植患者,35例预处理期间应用atg,监测其+28d、2m、3m各细胞亚群恢复情况。总t细胞、cd8+t细胞亚群计数,atg组及未应用atg组前3个月观察时间点无差异。初始cd8+t细胞于+2m未应用atg组即可恢复至对照组水平（251.25±136.58/μlvs300.4±125.65/μl,p=0.296）,而应用组至+3m仍低于对照组（p<0.05）。与44例患者+6m恢复至正常水平相比,可认为atg在移植早期抑制初始cd8+t细胞恢复。6.2hla全相合移植患者预处理期间应用atg9/18例,前6个月各监测时间点,atg组及未应用atg组相比,总t细胞及初始cd8+t细胞计数两组之间无统计学差异。cd8+t细胞及记忆cd8+t细胞值至4.5matg组高于无atg组,记忆性cd8+t细胞于3m、4.5m时有统计学差异（p=0.03、p=0.006）。其余时间点因病例数少,未做统计学分析。结论:1allo-hsct后cd8+t细胞及记忆cd8+t细胞恢复迅速,1个月恢复至正常水平;t细胞及初始cd8+t细胞+6m恢复至对照组水平;移植早期t细胞恢复以cd8+t细胞为主,而cd8+t细胞中以记忆性t细胞恢复为主。2agvhd时记忆性cd8+t细胞明显增高,初始cd8+t细胞增值速度加快。3atg在移植早期抑制初始cd8+t细胞恢复。

• 出版日期2017
• 单位河北医科大学