热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞损伤的作用

作者：白永成; 潘志国; 李勇逵; 郑玉美

来源：广东医学, 2015, 36(24): 3754-3758.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.2015.24.002

• 热打击
• 脂多糖
• 肠上皮细胞
• 氧自由基

目的探讨热打击联合脂多糖(LPS)刺激对人肠上皮细胞SW480损伤的生物学效应。方法体外培养SW480细胞,分为4组,对照组:将细胞置于37℃细胞培养箱中培养2 h;LPS刺激组:使用1μg/m L LPS刺激细胞6 h;热打击组:将细胞置于43℃细胞孵箱中培养2 h;联合组:先将细胞置于43℃细胞孵箱中培养2 h,然后再用1μg/m L LPS刺激6 h。采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞毒效应,WST-1检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,通过检测TEER值评估细胞通透性,酶标仪检测Caspase-3酶活性,Westen blot检测ZO-1蛋白的表达,DCFH-DA观察细胞内活性氧(ROS)水平。同时采用ROS特异性清除剂Mn TBAP预处理细胞,观察Mn TBAP对热打击联合LPS刺激诱导细胞损伤的影响。结果与对照组比较,热打击组及LPS刺激组LDH水平均显著升高(P<0.05),细胞存活率均显著降低(P<0.05);与热打击组及LPS刺激组比较,联合组LDH水平均显著升高(P<0.05),细胞存活率均显著降低(P<0.05)。与对照组比较,热打击组及LPS刺激组细胞凋亡率、Caspase-3表达量及ROS水平均显著升高(P<0.05),TEER值及ZO-1表达量均显著降低(P<0.05);与热打击组及LPS刺激组比较,联合组细胞凋亡率、Caspase-3表达量及ROS水平均显著升高(P<0.05),TEER值及ZO-1表达量均显著降低(P<0.05)。进一步研究发现由热打击联合LPS刺激诱导的上述损伤效应能够被Mn TBAP逆转,从而减轻由热打击联合LPS刺激引起的细胞损伤。结论热打击和LPS之间存在协同效应,介导细胞损伤,在这一过程中ROS可能作为上游信号启动了这一损伤效应。

• 出版日期2015
• 单位广州军区广州总医院; 四会市人民医院