牛副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶蛋白在杆状病毒中的表达

作者：卢元赫; 张玲玲; 张峣; 任博雯; 祝子涵; 冉旭华; 倪宏波; 刘阳阳; 李维香; 闻晓波

来源：中国生物制品学杂志, 2016, 29(04): 360-364.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.001291

• 牛副流感病毒3型
• 血凝素-神经氨酸酶蛋白
• 杆状病毒
• 真核细胞
• 基因表达

目的在杆状病毒中表达牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type-3,BPIV-3)血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN)。方法提取BPIV-3 BN-1株RNA,设计特异性引物扩增HN全长ORF,将其克隆至杆状病毒供体载体p Fast Bac HTA中,获得重组供体质粒p Fast Bac-HN。将p Fast Bac-HN转化至感受态细胞E.coli DH10Bac,制备穿梭质粒Bacmid-HN。将纯化的Bacmid-HN经脂质体转染至Sf21昆虫细胞,拯救重组杆状病毒,并进行Western blot鉴定。结果经PCR及测序鉴定证明,HN基因重组供体质粒p Fast Bac-HN及穿梭质粒Bacmid-HN构建正确。利用Sf21昆虫细胞成功拯救重组杆状病毒,连续传代扩增3代的病毒滴度为2×108 CPE/ml。重组HN蛋白的相对分子质量约70 000,可与BPIV-3阳性血清发生特异性反应。结论在杆状病毒表达系统中成功表达了BPIV-3重组HN蛋白,为BPIV-3的诊断及疫苗效力评价奠定了基础。

• 出版日期2016
• 单位动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学