HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用

作者：高淼; 黄峥兰; 李千音; 李会; 钟梁; 冯文莉

来源：临床检验杂志, 2013, (04): 268-271.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2013.04.016

• 原核表达
• 蛋白质纯化
• BCR-ABL
• 慢性粒细胞白血病
• ABL结合结构域 prokaryotic expression
• protein purification
• BCR-ABL
• chronic myeloid leukemia
• Abl binding domain

目的构建经原核表达和纯化的HA-2FKBP-ABD(HF2A)融合蛋白,探讨HF2A对BCR-ABL的靶向作用。方法用PCR扩增HF2A片段,将HF2A克隆入pET32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化HF2A蛋白,SDS-PAGE分析诱导和纯化的条件,western blot鉴定HF2A蛋白的表达,pull down实验检测HF2A与BCR-ABL的相互作用。结果重组原核表达载体经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;0.1 mmol/L IPTG 25℃诱导4 h获得HF2A蛋白的高表达,其分子量(Mr)约为74 000,纯化后可获得高纯度的HF2A蛋白;HF2A...

• 出版日期2013
• 单位重庆医科大学