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摘要
类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）病人滑膜成纤维细胞（Fibroblast-like synoviocytes,FLS）是研究RA发病机制和进行RA药物筛选的最理想的细胞来源.但是对于众多非医疗机构的高校和科研院所而言,由于RA病人滑膜组织不易获取而难以进行细胞水平的操作.因此,建立胶原诱导的关节炎大鼠（Collagen-induced arthritis,CIA）模型,成功分离膝关节滑膜组织并进行滑膜成纤维细胞的原代培养和纯化,将有效解决RA FLS的来源问题,为后续实验奠定基础.本实验通过皮内和皮下两次注射鸡Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠罹患关节炎,通过关节炎指数评分和膝关节HE染色明确CIA模型的建立;分离膝关节滑膜组织,采用Ⅱ型胶原酶和无EDTA胰酶消化法分离细胞并进行传代培养,传至第三代时,细胞免疫荧光检测细胞中VCAM-1蛋白含量以鉴定细胞纯度.结果显示,滑膜组织经过消化和培养后得到大量大鼠滑膜成纤维细胞;在显微镜下观察所得细胞呈梭形树突状,具有成纤维样细胞特征;VCAM-1蛋白阳性细胞达98%以上,确证所分离细胞为滑膜成纤维样细胞,且纯度极高.本研究建立了较简便快捷地获得大量滑膜成纤维细胞的方法,为RA的发病机制研究和药物防治提供了丰富的实验材料.
- 出版日期2017
- 单位南京师范大学; 生命科学学院
