摘要

研究旨在利用蛋白组和代谢组技术探究叶酸剥夺对鸡原代肝细胞脂代谢的影响。试验将分离培养的鸡原代肝细胞分为对照组和叶酸剥夺组,每组6个重复,处理时间为12 h,通过RT-qPCR、MTT、ELISA等探究鸡原代肝细胞脂质代谢、抗氧化、叶酸转运与代谢基因表达、DNA甲基化的变化。结果显示:叶酸剥夺后,细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平显著升高(P<0.05);肝细胞还原型叶酸载体(RFC)mRNA表达量显著降低(P<0.05),叶酸受体(FR)mRNA表达量也呈现下降趋势(P=0.064);成脂相关基因:脂肪酸合成酶(FAS)和胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)mRNA表达量显著降低(P<0.05),乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA表达量也呈下降趋势(P=0.071),但与β-氧化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)mRNA表达量无显著差异(P>0.05);胰岛素/IGF通路相关因子:胰岛素样生长因子2(IGF2)和胰岛素受体(INSR)mRNA表达量显著下调(P<0.05),苏氨酸激酶2(AKT2)mRNA表达量显著升高(P<0.05);与DNA甲基化相关的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA丰度显著下调(P<0.05)。蛋白组京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析显示,与脂代谢相关的肌醇磷酸盐代谢、铁死亡、Apelin信号通路等通路发生显著变化(P<0.05);代谢组数据显示,与糖脂代谢密切相关的糖酵解或糖异生、丙酮酸盐代谢、三羧酸循环显著富集(P<0.05)。综上所述,叶酸剥夺通过降低DNMT1的表达进一步导致甲基供体SAM水平降低以及PI3K/AKT通路的激活引起肝细胞中脂质沉积的增加。